基于荧光共振能量转移快速检测食品中的四环素(4)

图9 不同含量的TCs抗原和荧光恢复量（I-I0）的线性关系Fig.9 The linear relationship image between the different concentration of TCs Ag-BSA and the fluorescence recovery（I-I0）in systems

2.4 将FRET体系应用于牛奶中检测TCs的试验结果

图10为牛奶中不同浓度TCs Ag-BSA荧光光谱图，图11～图12为牛奶中不同浓度的TCs抗原与542 nm处的荧光强度之间以及和荧光恢复量的线性关系，图13为20 ng/mL浓度下BSA、TCs Ag-BSA、DO和TC的荧光强度变化图。

图10 牛奶中不同浓度TCs抗原的荧光光谱图Fig.10 UC fluorescence spectra of the FRET system at different concentrations of TCs Ag-BSA in the milk

图11 牛奶中不同浓度的TCs抗原与542 nm处的荧光强度之间的线性关系图Fig.11 The linear relationship between the concentration of TCs Ag-BSA and the UC fluorescent intensity at 542 nm in milk

图12 牛奶中不同TCs抗原浓度和荧光恢复量的线性关系图Fig.12 The linear relationship between the different concentration of TCs Ag-BSA and the fluorescence recovery in the milk

图13 20 ng/mL浓度下BSA、TCs Ag-BSA、TC和DO在牛奶中的荧光光谱图Fig.13 Differential fluorescence response of the aptasensor to BSA，TCs Ag-BSA，antibiotic of DO and TC at the same concentration（20 ng/mL）

为了检测牛奶中的TCs，固定供体和受体的浓度，通过添加不同浓度的游离抗原，检测在976 nm的红外光激发下的发光强度变化量。从图11可看出牛奶中的荧光强度随着TCs Ag-BSA浓度的增加而增加，直至100 ng/mL。如图11、图12所示，在0.1 ng/mL～100 ng/mL之间抗原浓度与体系的荧光强度显示出良好的线性相关性，相关系数（R2）高达0.990 93。当TCs Ag-BSA的浓度超过100 ng/mL时，荧光强度趋于稳定，并且基本上恢复了由FRET引起的淬灭，得到检测限为1 ng/mL。这表明该方法适用于牛奶中的TCs检测，所构建的FRET体系对四环素类药物的检测具有良好的灵敏度和特异度。

在UCNPs-GNPs体系中，在牛奶样品中加入BSA的荧光强度与未加之前相比基本没有太大变化，说明BSA不会破坏UCNPs-GNPs体系。然而，添加了TCs Ag-BSA、DO和TC的牛奶样品的荧光强度均增强，说明三者均能与体系中的TCs Ab-UCNPs发生免疫反应，破坏UCNPs和GNPs的FRET体系，使得荧光量恢复。这说明基于UCNPs-GNPs所构建的FRET体系可以运用到牛奶样品中含四环素类药物的检测。

3 结论

本文基于UPNT技术建立的荧光共振能量体系快速检测食品中四环素类兽药残留的方法，具有简便、灵敏、稳定等优点，适用于牛奶中TCs含量的检测，对牛奶中的TCs检测最低检测限为0.1 ng/mL。线性相关度在0.1 ng/mL～100 ng/mL，且操作简单、特异性好，能够很好地解决传统方法的局限，同时也能实现TCs的快速检测。这不仅为食品安全检测提供新思路，也为UPNT运用于检测食品中农兽药残留提供了良好的基础。

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文章来源：《无损检测》 网址: http://www.wsjczzs.cn/qikandaodu/2021/0625/568.html